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牛血清白蛋白(BSA),是牛中的一種球蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為 66.446kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用,如在免疫分析實驗中作為封閉劑和作為抗體保護(hù)劑。
BSA的制備方法主要有以下幾類:
1、冷乙醇方法
1940年由哈佛大學(xué)的Cohn的發(fā)明的,多步蒸餾法,血清蛋白可以根據(jù)控制不同的溫度和不同的乙醇濃度進(jìn)行分離。他利用兩這種不同來把血清分離成五種組分,第五部分含有最多的白蛋白,所以叫做第五組分。冷乙醇法由于加入了有機(jī)溶劑,需要在溫度極低的情況下在血液中加入乙醇直到白蛋白析出,會有殘留溶劑造成BSA 純度不高?,F(xiàn)代工藝對Cohn冷乙醇法進(jìn)行了不斷的改進(jìn)。
2、熱休克法
heat-shock熱激包含控制溫度和過濾來分離白蛋白?,F(xiàn)在傾向于在幾個關(guān)鍵步驟用熱代替有機(jī)溶劑,因為乙醇有易揮發(fā)和危險性。熱休克法生產(chǎn)的BSA產(chǎn)量高,純度也高,逐漸取代Cohn法成為BSA分餾主要方法,但是熱休克法BSA也有一些缺陷:BSA蛋白高溫變性,活性低。
3、色譜層析法(Chromatographic)法
色譜層析法是目前BSA生產(chǎn)的先進(jìn)方法,也是溫和的方法;主要包括三個步驟,超濾,離子交換色譜層析和硫酸銨沉淀;整個過程,無加熱,無乙醇,無辛酸,保護(hù)BSA自然結(jié)構(gòu)和功能,純度高,適合細(xì)胞培養(yǎng)。但與其他方法比成本較高。