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問題一:
在過氧化物標(biāo)記的雙夾心elisa實(shí)驗(yàn)中得到的背景值較高,原因是什么?LowCross-Buffer?能起到什么作用嗎?
答復(fù):了解二抗能否與其他哺乳動(dòng)物的抗體結(jié)合是非常重要的。除非是高度純化的抗體,抗兔lgG的二抗也能夠與鼠lgG,山羊lgG結(jié)合,原因是哺乳動(dòng)物抗體的高度同源性,不經(jīng)過純化(預(yù)吸附)的二抗可以與其他抗體進(jìn)行高親和性的交叉反應(yīng),這種情況下,LowCross-Buffer起不到作用,二抗必須不能與捕獲抗體結(jié)合,例如,Biotrend可以提供各類避免此類交叉反應(yīng)的預(yù)吸附抗體。
問題二:
我需要對(duì)LowCross-Buffer?進(jìn)行稀釋嗎?
答復(fù):是即用型的。樣品或檢測(cè)抗體直接用此稀釋,僅僅在競(jìng)爭性實(shí)驗(yàn)或一些免疫組化實(shí)驗(yàn)中,可以用水或一些生理緩沖液對(duì)其進(jìn)行稀釋。在這種情況下,實(shí)驗(yàn)者要通過測(cè)試找到合適的比例。
問題三:
LowCross-Buffer?會(huì)對(duì)酶標(biāo)檢測(cè)的顯色反應(yīng)產(chǎn)生影響嗎?
答復(fù):LowCross-Buffer?不會(huì)使堿性磷酸酶或過氧化物酶活性減弱。
有的用戶把酶標(biāo)檢測(cè)抗體在LowCross-Buffer?孵育后會(huì)檢測(cè)到酶活性的增強(qiáng)。
問題四:
LowCross Buffer?能用在熒光物質(zhì)結(jié)合物中嗎?比如在蛋白芯片實(shí)驗(yàn)中。
答復(fù):是的,可以用在蛋白芯片中。對(duì)于青染料(如Cy5, Cy3,),有的實(shí)驗(yàn)中可觀察到熒光量的增強(qiáng)。
問題五:
可以用于抗體或多克隆抗體嗎
答復(fù):可以,不過在使用多抗時(shí),要注意到多抗中含有親和力不同的多種抗體,LowCross-Buffer?僅允許高親和性的抗體結(jié)合而消除低親和性的結(jié)合。使用LowCross-Buffer?時(shí)可適當(dāng)增加多抗的濃度,因?yàn)榭贵w濃度的增加也是高親和性抗體濃度的增加,同時(shí)LowCross-Buffer?抑制低親和性結(jié)合。但是不是要加大抗體的濃度還要取決于抗體的純度。
問題六:
LowCross-Buffer?可以反復(fù)凍融嗎?
答復(fù):反復(fù)凍融幾次不會(huì)有影響,但是在使用前要充分混勻。
問題七:
為什么LowCross-Buffer?能減少交叉反應(yīng)?
答復(fù):我們所說的基質(zhì)效應(yīng)一般是一些基質(zhì)成分(如人血清標(biāo)本中的血清蛋白)的與分析物或抗體的低親和性結(jié)合。分析物會(huì)被標(biāo)本中的蛋白或其他成分掩蔽掉而不能與抗體結(jié)合,抗體也可以被基質(zhì)掩蔽。LowCross-Buffer?可以減少基質(zhì)對(duì)抗體的掩蔽。
問題八:
LowCross-Buffer?可以用在哪些方面?
答復(fù):LowCross-Buffer?是一種新的用于免疫實(shí)驗(yàn)(如ELISA、WB、蛋白芯片和免疫-PCR)的樣本緩沖液,有助于減少干擾作用,如非特異性結(jié)合,交叉反應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng),抗原抗體的高親和結(jié)合不會(huì)被減弱。
問題九
LowCross-Buffer?能替代表面封閉液嗎?
答復(fù):不行,LowCross-Buffer?不是表面封閉液,你可以用它稀釋樣本和抗體,我們推薦使用CANDOR的封閉液,能起到很好的封閉作用。